問題解答
高通量組織研磨儀提取動(dòng)物組織樣品時(shí)的各種疑問解答
很多用戶在使用高通量組織研磨儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)操作進(jìn)行研磨時(shí)會(huì)產(chǎn)生很多疑問,例如:?動(dòng)物毛發(fā)、人類頭發(fā)蘊(yùn)藏著大量的信息,如何能在不損害成分的情況下,進(jìn)行破碎研磨?動(dòng)物組織韌性大,一般研磨無法完成,該怎么辦?塑料對(duì)溫度太敏感了,很容易變形,怎么粉碎檢測?牙齒是人體最堅(jiān)硬的部分,想要檢測成分,該如何快速研磨呢?電路板要進(jìn)行rohs檢測,什么樣的前處理能更有利于檢測?
提取的方法:
樣品采集、制備和組織研磨:采集新鮮動(dòng)物組織樣本,修剪至約50-100mg濕重,在液氮中快速冷凍,并保存在-80℃低溫冰箱中。樣品來自于人、狗、貓、老鼠、牛、馬、還有魚和蛤,在提取DNA或RNA之前,將這些冷凍后的組織,放入深孔板中,并將深孔板放置在干冰上冷凍。每個(gè)孔中放入兩顆4m鋼珠,再加入500mL緩沖液(應(yīng)用生物系統(tǒng)核酸純化裂解緩沖液)。
用深孔板蓋板密封,在高通量組織研磨儀上以每分鐘1000次的速度研磨2min。4℃環(huán)境下培養(yǎng)30min后,用裂解液提取gDNA或總RNA。使用高通量組織研磨儀優(yōu)化后,再使用6700全自動(dòng)核酸工作站進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR,最后提取的RNA或DNA的組織量在10到20mg之間。為了評(píng)估提取的基因組DNA的質(zhì)量,開發(fā)了針對(duì)單個(gè)拷貝基因的物種特異性系統(tǒng),以定量基因組當(dāng)量和細(xì)胞數(shù)量。
使用高通量組織研磨儀來研磨動(dòng)物組織,可以快速高通量的完成樣品制備,且核酸提取量高、提取的核酸質(zhì)量更好,滿足各樣品的研磨實(shí)驗(yàn),如塑料玩具/嬰幼兒用品、電路板、肉類(牛肉/雞肉/魚肉)、狗糧、毛發(fā)(人類 、動(dòng)物)、橡膠、牙齒、聚四氟乙烯、骨骼、土豆(各類俗稱及類似食物)、聚乙烯(器具-低密度/高密度)、熱塑性塑料(可回收的),如塑料瓶、橡熱固性塑料(不可回收) 如:環(huán)氧樹脂、酚醛樹脂、地毯、木材等。
高通量組織研磨儀采用電磁撞子專利研磨技術(shù),將裝有樣品的密閉容器浸入液氮中,在-196℃環(huán)境下,快速徹底地粉碎樣品,使研磨時(shí)間更短,研磨樣品更為精細(xì),同時(shí)保證樣品性質(zhì)不發(fā)生變化,是公認(rèn)的“終極研磨手段”,廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、動(dòng)植物、醫(yī)學(xué)、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。